Ounuo98009-青霉-素酶联免疫试剂盒

青-霉素酶联免疫试剂盒

(一步法)

（货号：Ounuo98009）

一、药物概述及检测原理

本试剂盒利用青-霉素抗体与青-霉素可产生特异性结合的性质，先在酶标板上预包被抗原，再加入标准品（样本）和青-霉素抗体，青-霉素药物与固定在酶标板上的抗原竞争青-霉素抗体，最后加入底物催化显色。

二、试剂盒内包含组分

v  标准品工作液：0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb，1mL/瓶。

v  96孔酶标板：1块

v  11x酶标记物浓缩液：1瓶（0.7mL/瓶）

v  酶标记物稀释液：1 瓶（7mL/瓶）

v  20×浓缩洗涤液：1瓶（30 mL/瓶）

v  样本-稀释液：1瓶（20 mL/瓶）

v  底物A液：1瓶（7 mL/瓶）

v  底物B液：1瓶（7 mL/瓶）

v  终止液：1瓶（7mL）

v  说明书

v  盖板膜

v  自封袋

v  合格证

三、需要自备的设备和试剂

（1）仪器：

v  酶标仪（检测波长450nm、630nm）

v  电子天平（精度：0.01 g）

v  离心机（4000g及以上）

v  生化培养箱（可调25℃）

v  旋涡振荡器

v  微量移液器：（20μL-200μL、100μL-1000μL各一支、30-300μL八道排枪）

v  计时器

（2）试剂：（试剂均为分析纯）

v  去离子水

v  浓盐酸（分析纯）

四、试剂盒特异性

　　　试剂盒与其他药物的交叉反应率：

v  青霉-素………………………………………100.0

五、样本检测步骤

1.   工作液准备

v  洗涤工作液：取1份20×浓缩洗涤液加去离子水19份按照1:19的比例稀释即得。

v  1 M HCl：量取8.6 mL浓盐酸，加入去离子水定容至100 mL。

2.   样品前处理

1）组织样本方法 (稀释倍数：10倍)

Ø  称取 1.0±0.05g 样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入4 ml去离子水,高速涡动1min，3000g 以上，室温离心5min；

Ø  移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯离心管中，加入200ul样本-稀释液，用涡旋仪涡动10S;

Ø  取50 ul 用于分析。

2）鸡蛋样本方法 (稀释倍数：10倍)

Ø  称取 1.0±0.05g 均质样本至10mL聚苯乙烯离心管中，加入4 ml去离子水,再加入150uL 1M HCl（见配液5.1）高速涡动1min，3000g 以上，室温离心5min；

Ø  移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯离心管中，加入200ul样本-稀释液，用涡旋仪涡动10S;

Ø  取50 ul 用于分析。

3）纯牛奶样本方法 (稀释倍数：10倍)

Ø  移取1.0mL纯牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入4 ml去离子水,再加入40uL1 M HCl（见配液5.1）高速涡动1min，3000g 以上，室温离心5min；

Ø  移取200ul上清液至2ml聚苯乙烯离心管中，加入200ul样本-稀释液，用涡旋仪涡动10S;

Ø  取50 ul 用于分析。

3.  检测

Ø  准备：将要使用的酶标板条插入酶标板架上，并记录各标准品和样品的位置，为减小检测值波动建议做双孔平行实验（每个样本/标准品点两孔），未使用的酶标板条用自封袋密封后，保存于2-8℃环境中以防变质；

Ø  加样：向对应微孔中加入标准品工作液/样品溶液50 μL；

Ø  酶标记物工作液配制：取1份11X浓缩酶标记物加10份酶标记物稀释液按照1:10的比例稀释即得。（注：请务必按需现混现用！）

Ø  向每孔中加入50 μL酶标记物工作液；

Ø  孵育：轻轻振荡酶标板10 s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应30 min；

Ø  洗涤：取出酶标板后小心揭开盖板膜，倒出板孔中液体后，在每孔加250μL洗涤工作液，浸泡15-30s后倒掉洗涤工作液，然后再加入洗涤工作液重复洗涤3~4次后，将酶标板倒置于吸水纸上，用力拍干；

Ø  显色：在每孔中加入100μL 底物A和底物B的混合液（注：底物A液、底物B液必须按体积1:1充分混合，混合液在10 min内使用，切不可使用金属容器盛装、搅拌试剂以免底物变质失效）；

Ø  孵育：轻轻振荡酶标板15 s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应10-15min；

Ø  终止：在反应后的微孔中加入终止液50μL/孔，底物液由蓝变黄表明终止成功。

Ø  读数：终止后的酶标板应在5 min内用酶标仪读数，建议使用450nm、630nm双波长读取酶标板吸光度值。

4.  计算结果

Ø  设各标准品（或样品）的吸光度平均值为B，零标准（浓度为0 ppb的标准品）吸光度平均值B₀以(B/B₀)×100为各标准品（或样品）对应的吸光度的百分比：

Ø  使用半对数系统代入标准品对应的吸光度的百分比，与标准品浓度拟合出标准曲线。

Ø  将待检样品吸光度的百分比代入拟合出的标准曲线方程中，即可得出样品对应的浓度，最后乘以样品相应的稀释倍数，即可得出样品中检测物含量。

六、试剂盒参数

Ø 试剂盒灵敏度：0.05ppb；

Ø 标准曲线范围：0.05ppb-4.05ppb；

Ø 板内变异系数：<5%；

Ø 板间变异系数：<15%；

Ø B0吸光度值：>0.8；

Ø 回收率：90%±30%

Ø 样品检测限：

  组织、鸡蛋、纯牛奶………………………1 ppb

注：ppb=ng/mL或ng/g。

七、分析限制

　　　本试剂盒为定量或半定量试剂盒，建议用于大量样本筛查分析。若检测结果为阳性，建议使用仪器方法开展确证实验（如GC/MS、LC-MS/MS等）。

八、试剂盒贮存条件

Ø 试剂盒贮存温度为2-8℃，切勿冻存。

Ø 未使用完的酶标板须密封保存2-8℃的环境中。

九、注意事项

Ø 使用试剂盒前，请务必仔细阅读说明书。

Ø 试剂盒使用前，需将盒内各组份置于实验台上回温至室温（25±2℃）（提示：约1 h）。

Ø 试剂使用前需摇匀，混合时应避免出现气泡。

Ø 枪头为一次性用品，为防止试剂交叉污染，检测过程中所用枪头不得重复使用。

Ø 请勿使用过期试剂盒，不同批号试剂盒中的试剂不得混用。

Ø 样品处理完毕后请立即分析，否则可能影响检测结果。

Ø 底物A液、底物B液均为无色透明液体，若在使用前已变成蓝色，或混合后立即变蓝，说明试剂已污染或变质。

Ø 加样过程在保证精度的前提下一定要迅速，以免反应时间差对检测结果产生影响。

Ø 终止液中含有硫酸，若不小心溅上皮肤或衣物请立即用大量清水冲洗。