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五、菌落总数测试片使用说明
1 原理及适用范围:菌落总数是指样品经过处理,在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数,是zui常用的检测项目指标。菌落总数测试片(Aerobic Count Plates BB202)是一种预先制备好的一次性培养基产品,含有标准的营养培养基,冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂——氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在测试片上呈紫红色或粉红色,这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于食品及水中菌落总数的测定,也可用于与食品接触的容器操作台和其他设备表面的卫生检测。
2 样品处理与稀释
2.1 生活饮用水:取充分混匀的水样(原液)检测。
2.2 水源水:以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,振摇后成为1:100的稀释液,以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每次换一支吸管。
2.3 食品:取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,充分混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,振摇后成为1:100的稀释液,以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每次换一支吸管。
3 接种:将菌落总数测试片(BB202)置于实验台面,揭开上层膜准备接种。生活饮用水、纯水和矿泉水取原液,每个样品做两片;水源水以及食品选择2~3个稀释度进行检测,每个稀释度同时应做一平行接种。以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL混匀的样品液,慢慢均匀地滴加到测试片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,zui后用手轻轻地压一下。每次检测,同时将1mL灭菌生理盐水滴加到另一片测试片上作为空白对照。
5 结果判读: 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(10~100个)的测试片进行计数,乘以稀释倍数后即为每毫升(克)样品中所含的细菌菌落总数。作菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各测试片菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时用。
6 计数原则及报告方式
6.1通常选择菌落在10~100个之间的测试片进行计数,乘以稀释倍数报告之(见表1实例1)。
6.2若有两个稀释度的菌落数在10~100个之内,两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则用值小者(见表1实例2、例3)。
6.3若三个稀释度的菌落数都有在10~100个之内,应选择二个低数值的平均数(见表1实例4)。
6.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时,应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的zui小值,或采用均大于数量标准的zui大值(见表1实例5、例6)。
6.5若所有稀释度的测试片均无生长,以未检出报告之。菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采样两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
实例 | 稀释度 | 两稀释 度之比 | 选定计数 稀释度 | 报告方式 (个/g或 个/mL) | ||
10-1 | 10-2 | 10-3 | ||||
1 2 3 4 5 6 | 158 208 265 98 8 295 | 76 68 82 50 5 174 | 5 12 50 15 1 106 | — 1.8 6.1 — — — | 10-2 10-2、10-3 10-2 10-1、10-2 10-1 10-3 | 7.6×103 9.4×103 8.2×103 3.0×103 8.0×10 1.1×105 |
7 表面取样方法:加1mL灭菌生理盐水在测试片上,静置至少1h使培养基凝固;提起上层膜,使*滤纸部分贴到待测物表面,用手在外侧轻压;然后将上盖膜合上,置培养箱内培养。
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